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细菌的葡萄糖醛酸苷酶在碱性条件下，作用于4－甲基伞形酮－β－D葡萄糖醛酸苷（4－Methylumbellifery－β－D－Glucuronide简称MUG）的β糖醛酸苷键，使其水解，释放的4－甲基伞形酮在366nm紫外灯下产生蓝白色荧光。97%的大肠埃希氏杆菌、10%的沙门氏菌以及少量的志贺氏菌具有葡萄糖醛酸苷酶。

GUS报导基因的定量检测

GUS 能与底物MUG（分子量352.3，4-甲基伞型酮-β-葡萄糖醛酸苷，4-methylumbelliferylβ-D-glucuronide）反应产生荧光物质MU（分子量198.2，4-甲基伞型酮，4-methylumbelliferone）。MU的激发波长为365nm，发射波长为456，其含量可由荧光分光光度计测出。因此，我们可以根据单位质量的植物总蛋白在单位时间内产生的荧光物质的多少来定量的检测GUS含量。

2.1 试剂配制

1)   1mol/L Na2HPO4溶液：35.814g Na2HPO4溶于100ml水。

2)   1mol/L NaH2PO4 溶液：15.601g NaH2PO4 溶于100ml水。

3)   0.1M 磷酸缓冲液(PH7.0)：1mol/L Na2HPO4取5.77ml，1mol/L NaH2PO4取4.23ml，定容至100ml。

4)   10％ SDS溶液：将90ml水稍微加热，加10g SDS，搅拌溶解，加入几滴浓盐酸调节PH至7.2，然后加水定容至100ml。

5)   0.5 M EDTA (PH8.0)：在80ml水中加入18.61g Na2EDTA?2H2O，用NaOH调PH至8.0（约需2g左右的固体NaOH），溶解后定容至100ml。

6)   GUS酶提取液：0.1M 磷酸缓冲液（PH7.0）取50ml；10% SDS取1ml； 0.5M EDTA(PH8.0)取2ml； Triton X-100取100ul；β-巯基乙醇100ul；用水定容至100ml。

7)   MUG底物：称8.8mg MUG，溶于10ml GUS酶提取液中，配制成2mmol/L的工作浓度。

8)   反应终止液（0.2 mol/L Na2CO3 ）：称2.12Na2CO3 ，用水定容到100ml。

9)   考马斯亮蓝G250溶液：考马斯亮蓝G250 10mg, 95%乙醇5m1, H3PO4 10ml，定容至l00ml，过滤后4℃保存。

10) １mg/ml BSA：20mg BSA，用GUS提取缓冲液定容至20ml。