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PfAgo Endonuclease PfAgo核酸内切酶
  • 型号:200ul
  • 货号:JY0316
  • 发布日期: 2023-10-26
  • 更新日期: 2024-08-30
产品详请
产地
品牌
货号 JY0316
用途
英文名称
包装规格 200ul
纯度 %
CAS编号
别名
分子式
是否进口

货号

名称

规格

存储

JY0316-S

PfAgo Endonuclease

200μL (200 U/μL)

-20℃

JY0316-L

PfAgo Endonuclease

400μL (200 U/μL)

-20℃

产品简介

PfAgo核酸内切酶(PfAgo Endonuclease)来源于重组大肠杆菌,含有从激烈火球菌(Pyrococcus furiosus)中克隆的Argonaute(Ago)核酸酶基因,是一种依托引导序列(guide DNA)与靶核酸碱基互补配对,继而特异识别并剪切靶核酸的核酸内切酶。PfAgo 核酸内切酶在5′磷酸化的guide DNA(大于15 nt)引导下精准剪切单链DNA底物,剪切位点位于与引导序列互补的5′端开始的第10和第11个核苷酸之间,剪切不受靶标序列和剪切位点相邻序列限制。本产品于95℃ 1 小时,酶活性不损失。

包装量与储存条件:

JY0316包装量为JY0316-S和JY0316-L,各组分于-20℃及以下运输及保存,有效期为24 个月。长期保存建议放-80℃。

名称

JY0316-S

JY0316-L

PfAgo Endonuclease

200μL (200 U/μL)

400μL (200 U/μL)

10 × PfAgo Endonuclease Reaction Buffer

0.5 mL

1 mL

 

使用方法:

1、 自备以下仪器、试剂及耗材,辅助完成后续PfAgo Endonuclease切割反应。

仪器:PCR 仪器(ABI7500、 QuantStudio 5、Stepone plus)、金属浴或水浴锅;

试剂:40 mM Mn2+( Nuclease-free H2O配制)、Nuclease-free H2O;

合成引物:guide DNA:5′ P-TTTGGAGCTGGTGGCG 3′;

ss DNA:5′-6-FAM-CCTACGCCACCAGCTCCAACTACCACAA-BHQ1 3′ 

耗材:Nuclease-free free EP 管。

2、按下表,配制反应体系,并混合均匀。

名称

体积

10 μM ssDNA

2μL

10 μM guide DNA

4μL

40 mM Mn2+

1μL

10 ×PfAgo Endonuclease Reaction Buffer

2μL

PfAgo Endonuclease (200 U/μL)

4μL

Nuclease-free H2O

up to 20μL

注:一般使用20 μL 体系,但也可以等比例放大;

试验前用Nuclease-free H2O将ssDNA 、guide DNA 稀释至相应浓度。

2、95℃孵育30 min。

3. 反应产物可直接进行核酸胶电泳分析。如果不立即电泳,可以加入EDTA 终止反应,并先冻存于-20℃。

      

1.对照DNA的酶切结果                             图2 酶活检测曲线图