产地 | |
品牌 | |
货号 | JY0316 |
用途 | |
英文名称 | |
包装规格 | 200ul |
纯度 | % |
CAS编号 | |
别名 | |
分子式 | |
是否进口 |
货号 |
名称 |
规格 |
存储 |
JY0316-S |
PfAgo Endonuclease |
200μL (200 U/μL) |
-20℃ |
JY0316-L |
PfAgo Endonuclease |
400μL (200 U/μL) |
-20℃ |
产品简介
PfAgo核酸内切酶(PfAgo Endonuclease)来源于重组大肠杆菌,含有从激烈火球菌(Pyrococcus furiosus)中克隆的Argonaute(Ago)核酸酶基因,是一种依托引导序列(guide DNA)与靶核酸碱基互补配对,继而特异识别并剪切靶核酸的核酸内切酶。PfAgo 核酸内切酶在5′磷酸化的guide DNA(大于15 nt)引导下精准剪切单链DNA底物,剪切位点位于与引导序列互补的5′端开始的第10和第11个核苷酸之间,剪切不受靶标序列和剪切位点相邻序列限制。本产品于95℃ 1 小时,酶活性不损失。
包装量与储存条件:
JY0316包装量为JY0316-S和JY0316-L,各组分于-20℃及以下运输及保存,有效期为24 个月。长期保存建议放-80℃。
名称 |
JY0316-S |
JY0316-L |
PfAgo Endonuclease |
200μL (200 U/μL) |
400μL (200 U/μL) |
10 × PfAgo Endonuclease Reaction Buffer |
0.5 mL |
1 mL |
使用方法:
1、 自备以下仪器、试剂及耗材,辅助完成后续PfAgo Endonuclease切割反应。
①仪器:PCR 仪器(ABI7500、 QuantStudio 5、Stepone plus)、金属浴或水浴锅;
②试剂:40 mM Mn2+( Nuclease-free H2O配制)、Nuclease-free H2O;
③合成引物:guide DNA:5′ P-TTTGGAGCTGGTGGCG 3′;
ss DNA:5′-6-FAM-CCTACGCCACCAGCTCCAACTACCACAA-BHQ1 3′ ;
④耗材:Nuclease-free free EP 管。
2、按下表,配制反应体系,并混合均匀。
名称 |
体积 |
10 μM ssDNA |
2μL |
10 μM guide DNA |
4μL |
40 mM Mn2+ |
1μL |
10 ×PfAgo Endonuclease Reaction Buffer |
2μL |
PfAgo Endonuclease (200 U/μL) |
4μL |
Nuclease-free H2O |
up to 20μL |
注:一般使用20 μL 体系,但也可以等比例放大;
试验前用Nuclease-free H2O将ssDNA 、guide DNA 稀释至相应浓度。
2、95℃孵育30 min。
3. 反应产物可直接进行核酸胶电泳分析。如果不立即电泳,可以加入EDTA 终止反应,并先冻存于-20℃。
图1.对照DNA的酶切结果 图2 酶活检测曲线图