产品信息

简介

蛋白磷酸化改变是许多人类癌症的一个特征，可以作为治疗的靶点。磷酸化肽段的浓缩是最大限度地 扩大MS对磷酸化蛋白质组覆盖深度的关键步骤，但由于其高度的复杂性，对于组织标本来说仍然具有 挑战性。

2017年，本研究院团队首次在血浆外泌体中发现大量的磷酸化蛋白 (PNAS,2017)。该文展示了一种 从人血浆中分离和鉴定细胞外囊泡(EVs)中的磷酸化蛋白的策略，作为区分疾病和健康状态的潜在标  记物。我们在从少量血浆样本分离的EVs中发现了近10,000个独特的磷酸化肽段。利用无标记定量磷  酸化蛋白质组学，我们在血浆EV中鉴定出144种磷酸化蛋白，在被诊断为乳腺癌的患者中显著高于健  康对照组。使用平行反应监测进行靶向定量，在个体患者中验证了几个生物标志物。这项研究表明， 发展血浆EV中的磷酸化蛋白作为疾病生物标志物是高度可行的，并可能改变癌症的筛查和监测。

优势

1.可实现磷酸化肽段的高效富集。

2.适用于大多数复杂的样品。

3.提供了最佳的特异性和回收率。

原理

由于磷酸化的化学计量比较低，因此磷酸肽的浓缩是成功进行磷酸蛋白质组学实验的关键步骤。

PolyMAC提供了一种有效的、大大改进的方法来实现更完整的磷酸肽的富集化。这种高度选择性的富  集法可以用于大多数复杂样品，因为它提供了最佳的专属性和回收率。 PolyMAC是一种基于聚合物的  固定化金属离子亲和捕获法，具有卓越的磷酸化蛋白质组覆盖率和回收率。它是一种可溶性纳米聚合 物，设计用于与溶液中的磷肽相互作用，随后在固相载体上捕获，用于洗涤和磷肽洗脱。与常用的二 氧化钛和固定化金属离子亲和捕捉法相比， PolyMAC具有更好的重现性和磷酸化肽段的富集性，磷酸  化肽段的选择性接近95%,回收率>90%。重要的是，对于总蛋白磷酸化水平较低的样品， PolyMAC具有 非常好的回收率和选择性。

组分说明

储存条件

将PolyMAC Beads储存在4℃,孵育液洗涤液等储存在室温。

案例

图3 PolyMAC与磷酸酪氨酸富集(A,C 和E)或在pH值为8的RPLC分选进行总磷蛋白组识别(B,D 和F)的性能

我们描述了首次使用基于聚合物的金属离子亲和捕获器(PolyMAC)在HER2驱动的乳腺癌转基因小鼠模  型上分析组织磷酸化蛋白质组。通过将磷酸酪氨酸免疫沉淀与PolyMAC相结合，从5次LC-MS/MS运行中 鉴定了411个具有139个磷酸酪氨酸、45个磷酸丝氨酸和29个磷酸苏氨酸位点的独特多肽。将反相高效 液相色谱在pH8.0条件下与PolyMAC联用，从8个LC-MS/MS运行中鉴定了1571个独特的多肽，其中1279个是磷酸丝氨酸，213个是磷酸苏氨酸，21个是磷酸酪氨酸。线性基序分析表明，许多亚磷酸基序对应于众所周知的磷酸化基序。用药物基因相互作用数据库分析酪氨酸磷酸化蛋白质组发现了一个潜在 的治疗靶点网络，该网络以含有FDA批准的或处于临床开发中的抑制剂的Src家族激酶为中心。这些结 果表明， PolyMAC非常适合于组织标本的磷酸化蛋白质组学分析。

说明书

操作具体示意图如下

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